Cell culture
2021. 11. 7. 16:11
🧬 Bio/생명공학
Cell culture 목차 1. Cell culture 1) Cell culture 란? 2) Cell culture의 종류 3) Subculture 4) Cell culture 방식 2. CHO cell 1) CHO cell 이란? 2) CHO-k1 cell 3. 실험 재료 및 방법 1) Trypsin-EDTA 2) Centrifuge에서 RCF, RPM의 차이 3) 실험 방법 Cell culture Cell culture 란? 생물체의 조직편이나 조직에서 분리된 세포들을 생물체내의 환경과 동일한 배양 시스템에서 유지시켜 줌으로써 조직이나 세포의 원래 기능을 보유하도록 하는 기술의 한 방법 활용 방법 1) 세포의 Morphology 관찰 2) 치료 목적의 유용한 물질 생산 3) 유전자 삽입 및 유전자..
DMSO 역할 및 독성
2020. 7. 16. 10:38
🧬 Bio/생명공학
DMSO는 dimethyl sulfoxide의 약자다. DMSO는 cell culture에서 자주 등장하는데, 실로 역할이 다양하다. DMSO는 polymerase chain reaction (PCR)에서 DNA template나 DNA primers에서 secondary structures의 형성을 방해하는 역할을 한다. DNA가 쫙 펼쳐져있어야 PCR이 원활하게 일어날 수 있을테니 납득할 수 있겠다. DMSO는 cryoprotectant에서도 쓰일 수 있다. cell media에 DMSO를 섞어주면 동결 과정에서 얼음 형성으로 인한 세포 타격을 줄여주는 효과가 있다. 약 10% 농도의 DMSO에서 slow-freeze method를 썼을 경우, 세포가 영하 80 °C에서 동결되고, 액체질소에서 안전히..
Cancer 용어 정리
2020. 7. 13. 09:37
🧬 Bio/생명공학
Xenograft Xenograft란 용어는 우리 말로는 "이종 이식"이며 서로 다른 종(species) 간에 조직이나 장기를 옮겨 심는 것을 말합니다. 돼지의 간을 사람에게 이식한다면 xenograft liver transplantation이라고 하는 거지요. 질문에서 xenograft tumor라는 것은, 예를 들자면, 사람에게서 발생한 암조직을 실험용 쥐에 이식한 것을 의미합니다. 암세포를 배양접시에서 배양하는 것 (in vitro)에 비해, 마우스에 옮겨서 xenograft 모델을 만들게 되면 암세포 외의 주변세포들과의 상호작용이 고려되기 때문에 좀 더 실제와 같은 조건에서 연구할 수 있는 장점이 있습니다. 참고로, 쥐에서 생긴 암조직을 다시 쥐로 이식할 때는 동종이식, 영어로는 allograft..
RNAi - shRNA, siRNA, miRNA, Knockdown, lncRNA
2020. 7. 10. 17:29
🧬 Bio/생명공학
RNAi - RNA interference. A process of mRNA cleavage and degradation that is induced by double-stranded RNA in a sequence specific manner. - A phenomenon in which the introduction of double-stranded RNA (dsRNA) into a diverse range of organisms and cell types causes degradation of the complementary mRNA. - 일반적으로 RNAi라는 용어는 dsRNA에 의해 sequence specific하게 타겟 mRNA이 degradation되어 특정 유전자가 down regulati..
Plasmid DNA란?
2020. 3. 9. 21:22
🧬 Bio/생명공학
목차 Plasmid DNA란? Vector DNA로써 Plasmid DNA의 구조적 특징 기능에 따른 Plasmid 분류 Plasmid DNA의 conformation(형태) Plasmid DNA란? 원핵생물과 일부 진핵생물이 자신의 염색체 DNA(위 그림에는 Bacterial DNA로 표시된 것) 외에 가지고 있는 작은 고리형 DNA를 말한다. 예를 들면, 대장균은 대장균 자신의 염색체 DNA(chromosomal DNA)가 있고, 크기가 더 작은 고리 모양의 또다른 DNA(circular DNA)가 있는 경우가 있다. 재밌는 건, 대장균과 같은 원핵생물의 경우 염색체 DNA도 플라스미드처럼 고리 모양이라는 것이다. 다만 그 크기가 크기 때문에 세포내에서 꼬여있는 상태로 존재한다 (윗 그림에도, Bac..
Gene Cloning
2020. 3. 9. 17:10
🧬 Bio/생명공학
Vector(벡터) 벡터란 플라스미드나 박테리오파지와 같은 DNA로서 세포 형질전환을 통해 특정 유전자나 DNA를 자신에게 삽입시켜 재조합 DNA를 만든 후 이것을 숙주세포로 전달하여 많은 수로 복제 될 수 있도록 하거나 또는 단백질로 발현될 수 있도록 하는 DNA운반체를 말한다. Vector의 조건 사본(copy)수가 많아야한다. 간단히 분리 및 정제가 가능해야 한다. 불필요한 유전정보를 최소화하여 작은 DNA로부터 외부 유전자 DNA를 클로닝 할 수 있어야한다. 복제 원점을 가지고, 숙주세포에서 독립적인 복제가 가능해야 한다. 제한효소 자리 집단(Multiple Clonning Site, MCS)이 있어야 한다. 선발 표지자(selection marker)가 있어야 한다. Clonning Vector..
PCR (Polymerase Chain Reaction)
2020. 3. 9. 16:51
🧬 Bio/생명공학
PCR (Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응) 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR)은 캐리 멀리스(Kary B. Mullis)에 의하여 1985년에 개발되어 현재 유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에 사용하고 있는 검사법으로, 검출을 원하는 특정 표적 유전물질을 증폭하는 방법입니다. 중합효소 연쇄 반응에 의해, 소량의 유전물질로부터 염기 순서가 동일한 유전물질을 많은 양으로 증폭할 수 있으므로, 인간의 DNA를 증폭하여 여러 종류의 유전질환을 진단하는 데 사용됩니다. 또한 세균이나 바이러스, 진균의 DNA에 적용하여 감염성 질환의 진단 등에 사용할 수 있습니다. 중합효소 연쇄 반응의 순서는 3단계로 이루어집니다. 열을 이용하여..
유전자가위 원리와 개발과정- 크리스퍼(CRISPR-Cas9, Cpf1)
2020. 2. 28. 17:55
🧬 Bio/생명공학
유전자가위(Genetic Scissors) 또는 분자가위(molecular scissors)란 생체의 특정 부위에 인공효소를 집어넣으면 세포 속 유전자의 특정 염기서열을 인식하여 원하는 대로 자르고 편집하는 기술을 일컫는 말이다. 쉽게 설명하자면 옷이 찢어졌을 때 찢어진 부분만 도려내고 새로운 천으로 바꿔치기 하는 "유전자 짜깁기" 기술로 인간이나 동식물 세포의 유전체를 교정하는 데 사용할 수 있다. ●유전자가위의 필요성과 탄생 배경 질병을 치료하는 방법에는 일반적으로 약물치료와 외과적 수술이 있다. 그러나 유전자 돌연변이에 의해 발생하는 유전질환의 경우 약물과 수술은 근본적인 치료방법이 될 수 없다. 이런 유전질환을 원천적으로 치료하는 방법을 유전자치료(gene therapy)라고 한다. 1990년대에..