유전공학 13장 (1)

1. 대량 생산을 위한 2가지 방법
   1. Batch culture : 닫힌 시스템에서 유용한 유전자 산물을얻는 것
   2. Continuous culture : 열린 시스템에서 배양을 하면서 새로운 배지를 넣어주면서 기존에 있던 배지를 빼준다. 오염위험이 있다.
2. 유전자를 동물세포에서 발현시키려면?
   1. 우리가 원하는 유전자를 벡터를 통해서 대장균에 도입해서 발현시킨다.
   2. 그러면 단백질을 대장균에서도 대량으로 얻을 수 있다.
3. 동물세포의 유전자를 대장균에서 발현시키기 위한 조건
   1. Promoter
   2. Ribosome Binding Site
   3. Terminator에 대한 Signal
   4. 그러나 Ribosome Binding Site 에서 서로 다른 Signal을 갖기 때문에 잘 작동하지 않는다.
   5. 이를 해결하기 위해 새로운 벡터가 필요하다 => Expression Vector
4. Inducible gene
   1. 유도자를 처리하여 전사를 발현시키게 하는 것
5. Repressible gene
   1. 발현은 되지만 원하지 않는 시기에 Off 시키는 것

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 Batch Culture & Continuous Culture 

어떻게 대량으로 뽑아낼까?

대량 생산을 위한 2가지 방법

Batch Culture : 닫힌 시스템에서 유용한 유전자 산물을 얻는 것

Continuous culture : 열린 시스템에서 배양을 하면서 새로 배지를 넣어주면서 기존에 있던 배지를 빼내준다.

오염위험이 있다.

 

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유전자를 동물세포에서 발현시키려면?

 

우리가 관심있는 유전자를 벡터를 통해서 대장균에 도입해서 발현시키면 동물세포에서 얻을 수 있는 단백질을 대장균에서도 대량으로 얻을 수 있다.

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Ribosome binding site의 공통적인 서열 = GGAGGU

진핵세포와 원핵세포의 번역 개시 signal이 다르다.

전사개시는 프로모터에서부터 시작이 되고 전사종결자에서 마무리 된다.

 

Promoter, Ribosome binding site, Teminator에 대한 signal이 필요하다.

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사실 동물세포의 Ribosome binding site에서 서로 다른 signal을 갖기 때문에 작동하지 않는다. 

동물세포의 전사개시점부터 앞쪽에 25개를 TATA 박스라고 부른다. (E.coli는 그렇게 부르지 않는다)

 

 

동물세포의 유전자를 대장균에서 발현시키고 싶다 하면 특별한 벡터를 써야한다.

Ecoli에서 발현되는 프로모터와 Ribosome binding site와 전사 종결자이다.

그러면 대장균이 자기 유전자처럼 번역해서 단백질을 만들게 된다.

근데 이것만 한다고 해서 발현이 되진 않는다.

 

이것은 발현을 통해 유전자의 산물(단백질)까지 보장하는 벡터이기 때문에 Expression vector라고 부른다.

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 Strong promoter & Weak promoter 

전사체가 많이 만들어질려면 프로모터를 강한 프로모터를 써야한다.

강한 : 아주 많은 전사체를 만듦

약함 : 적은 전사체를 만듦

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 Inducible gene & Repressible gene 

 

우리가 원할 때만 만들게 하는 inducible system을 쓴다.

유도자를 처리하면 발현되게끔 만든다.

 

Repressible은 늘 발현되지만 우리가 원하지 않는 시기에 Off 시키는 것이다.

그냥 놔두면 계속 발현되고 있다.

 

둘 중 자기의 유전자 산물에 따라서 적합한 방법을 택하면 된다.

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(a) 락토스 프로모터 : IPTG로 On 시킬 수 있다.

(b) 트립토판 프로모터 : 대장균이 필요로 하는 영양소이다.

트립토판은 항상 만들어져야 하는데 충분할 때에는 off가 된다.

이 반응을 이용해서 유도성과 억제성으로 사용할 수 있다.

(c) Tac promoter : 트립토판 프로모터와 락토스 프로모터를 융합시킨 것

IPTG로 On 할 수 있다.

(d) 람다PL 프로모터 : tscl repressor가 30도 이하에서는 작동한다.

30도 이상에서 기르게 되면 온도 민감성이기 때문에 Repressor가 작동하지 않는다.

작동하지 않는다 = On이 된다.

배양 온도만 바꿔준다면 On/Off 시킬 수 있다.

(e) T7 promoter : 아주 강력한 프로모터이다. 

 

시험 6.29아니면 7.2 둘 중 하나 10:20~12시